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（淮海工学院海洋学院,江苏 连云港 ２２２００５）
摘 要：为了研究纤维素酶法提取蒲公英（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ Ｈａｎｄ．－Ｍａｚｚ）中绿原酸的工艺,通过单因素试验探讨加酶量、料液比、提取温度、提取时间、ｐＨ对绿原酸提取率的影响,并通过正交试验对影响绿原酸提取率的参数进行优化.结果表明,蒲公英中绿原酸提取的最佳工艺条件为ｐＨ ６．０、加酶量３．０ ｍＬ、提取温度５０ ℃、提取时间１．０ ｈ,此条件下绿原酸提取率为１０．０３１ ｍｇ／ｇ.
关键词：蒲公英（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ Ｈａｎｄ．－Ｍａｚｚ）；绿原酸；提取工艺
中图分类号：Ｑ９４６．８；Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）18－4097-04
蒲公英（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ Ｈａｎｄ．－Ｍａｚｚ）别名蒲公草、黄花地丁、黄花三七、婆婆丁等,原产于欧洲,在中国大部分地区均有分布,其味甘苦,性寒,既是营养保健野菜,也是常用的中药材,为药食同源植物之一,是开发绿色天然植物型营养保健品理想的宝贵资源.
蒲公英含碳水化合物、脂肪、蛋白质、多种矿物质、微量元素以及维生素等营养成分,此外还含有蒲公英甾醇、蒲公英苦素、皂苷、胆碱、肌醇、咖啡酸、绿原酸、黄酮类等功能性化学成分,对金论文范文葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性链球菌、卡他球菌均有显著的抑制作用,即具有广谱抑菌作用,此外还具有利胆保肝、抗胃损伤、抗肿瘤、抗氧化、增强免疫等功能［１,２］.其中的绿原酸是一种多酚类物质,具有重要的生理活性,有抗氧化、抗艾滋病毒、抗致畸、抗过敏、抗肿瘤细胞毒活性、对透明质酸酶和葡萄糖－６－磷酸酶有抑制作用等功能［3］.因此蒲公英及其绿原酸成为功能性食品研究开发的热点,中国国内外已开发出蒲公英饮料、蒲公英酒、咖啡、糕点、糖果以及蒲公英花粉和蒲公英根粉等保健食品.目前,绿原酸提取的原料主要是金银花、杜仲叶,另外有葵粕、稻壳、甘薯、杭白菊、牛蒡叶等［4－１５］,其中蒲公英来源丰富,部分学者用水提或醇提方法进行了蒲公英中绿原酸提取的研究［１６］,而纤维素酶法具有条件温和、没有溶剂残留等优点.
研究采用纤维素酶法提取蒲公英中的绿原酸,用分光光度法测定提取液中绿原酸含量,计算绿原酸提取率,并对影响绿原酸提取率的因素进行了初步探讨,优化了绿原酸提取的工艺,为提高蒲公英的综合利用价值提供参考.
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 原料与试剂 蒲公英为２０１１年５月２７日采自山东省烟台市郊区的农田,将其于低温烘干粉碎过４０目筛；３５ ｋＵ／ｇ纤维素酶购自北京梦怡美生物科技有限公司,使用前配成5 g/L纤维素酶；绿原酸标准品（纯度＞９８％）购自北京中科三捷生物有限公司；无水甲醇、无水乙醇、盐酸均为分析纯.
１．１．２ 仪器与设备 ＨＷ·ＹＳ型数显恒温水浴锅购自浙江舟山市定海区海源仪器厂,电子分析天平购自赛多利斯科学仪器（北京）有限公司,Ｔ６新世纪紫外可见分光光度计购自北京普析通用仪器有限公司,ＰＨＳ－３Ｃ型精密酸度计购自上海精密科学仪器有限公司.
１．２ 方法
１．２．１ 纤维素酶法
１）工艺流程.选材→称量→加去离子水→加酶液→水浴加热→灭酶→用壳聚糖澄清→抽滤→取滤液定容→用分光光度法测定,计算绿原酸提取率.
蒲公英提取物:【植物大战僵尸2国际版新世界】第73期 蒲公英和章鱼，麦丝解说
绿原酸提取率＝提取液中绿原酸质量（ｍｇ）／原料用量（ｇ）
２）单因素试验.酶法提取的效果主要取决于加酶量、提取温度、提取时间、ｐＨ、料液比等因素,选取加酶量、提取温度、提取时间、ｐＨ、料液比作为主要考察因素.①加酶量对绿原酸提取率的影响.准确称取６份１ ｇ蒲公英干粉分别置于6个５０ ｍＬ三角瓶中,分别加入２０ ｍＬ去离子水浸润,然后分别加入０、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０ ｍＬ ５ ｇ／Ｌ纤维素酶,摇匀,ｐＨ保持自然状态,密封置于４０ ℃水浴锅中水浴２ ｈ,再置于８０ ℃水浴灭酶２０ ｍｉｎ,取出冷却后加入３ ｍＬ １０ ｇ／Ｌ壳聚糖溶液,静置１～２ ｈ,抽滤,将滤液置于５０ ｍＬ容量瓶中用去离子水定容,分别取２００ μＬ至１０ ｍＬ容量瓶中,用体积分数为５０％的甲醇溶液定容,于３２７ ｎｍ处测吸光度,以体积分数为５０％的甲醇溶液作参比,测吸光度,按公式计算绿原酸提取率.②提取温度对绿原酸提取率的影响.准确称取５份１ ｇ蒲公英干粉分别置于5个５０ ｍＬ三角瓶中,分别加入２０ ｍＬ去离子水浸润,然后分别加入最佳体积的５ ｇ／Ｌ纤维素酶,ｐＨ保持自然状态,于恒温水浴２ ｈ,水浴温度分别设为３０、４０、５０、６０、７０ ℃,再置于８０ ℃水浴灭酶２０ ｍｉｎ,取出冷却加入３ ｍＬ １０ ｇ／Ｌ壳聚糖溶液,静置１～２ ｈ,抽滤,将滤液置于５０ ｍＬ容量瓶中,用去离子水定容,分别取２００ μＬ至１０ ｍＬ容量瓶中,用体积分数为５０％的甲醇溶液定容,于３２７ ｎｍ处测吸光度,用体积分数为５０％的甲醇溶液作参比,测得吸光度,计算绿原酸提取率.③提取时间对绿原酸提取率的影响.加酶量、提取温度通过上述试验确定,提取时间分别设为０．５、１．０、１．５、２．０、２．５ ｈ.其他步骤同②.④ｐＨ对绿原酸提取率的影响.加酶量、提取温度、提取时间通过上述试验来确定,分别设为ｐＨ ４．５、５．０、５．５、６．０、６．５.其他步骤同②.⑤料液比对绿原酸提取率的影响.加酶量、提取温度、提取时间、ｐＨ通过上述试验来确定,料液比分别设为１∶１０、１∶１５、１∶２０、１∶２５、１∶３０（ｍ／Ｖ,ｇ∶ｍＬ,下同）.其他步骤同②.
３）正交试验.在上述单因素试验结果的基础上进行工艺优化试验.选择加酶量、提取温度、提取时间、ｐＨ进行四因素四水平的Ｌ１６（４５）正交试验,以绿原酸提取率为评价指标.在最佳工艺条件下进行绿原酸提取试验,３次重复,绿原酸提取率结果取均值.因素与水平见表１.
１．２．２ 绿原酸提取率的测定 最大吸收波长的选择：用电子分析天平精确称取４２．５ ｍｇ绿原酸,用体积分数为５０％的甲醇溶液溶解,并定容于１ ０００ ｍＬ的容量瓶中,摇匀,得到４２．５ μｇ／ｍＬ绿原酸标准溶液.取适量绿原酸标准溶液于2００～5００ ｎｍ范围内扫描,以体积分数为５０％的甲醇溶液作参比.
标准曲线的绘制：精密吸取以上绿原酸标准溶液０、１、２、３、４、５ ｍＬ,分别置于6个１０ ｍＬ容量瓶中,加体积分数为５０％的甲醇溶液定容,摇匀.在３２７ ｎｍ处分别测定不同浓度标准溶液的吸光度,以绿原酸标准样品浓度（μｇ／ｍＬ）为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线［１２］.
样品的测定：量取２００ μＬ样品溶液于１０ ｍＬ容量瓶中,置于６０ ℃干燥箱中挥干,用体积分数为５０％的甲醇溶液定容,以体积分数为５０％的甲醇溶液作参比,于３２７ ｎｍ处测定吸光度,计算绿原酸提取率.
２ 结果与分析
２．１ 最大吸收波长的确定
４２．５ μｇ／mＬ绿原酸标准溶液在３２７ ｎｍ处有最大吸收峰,故选择在３２７ ｎｍ处测定绿原酸溶液的吸光度.
２．２ 标准曲线及回归方程的建立
标准曲线见图1,绿原酸标准曲线的回归方程为y＝０．２２９ ２ｘ＋０．０２８ ５,相关系数ｒ＝０．９９７ １.结果表明,在0～２１．２５ μｇ／ｍＬ范围内有良好的线性关系.
２．３ 纤维素酶法提取试验的结果
２．３．１ 加酶量对绿原酸提取率的影响 由图2可知,不加纤维素酶时绿原酸提取率最低,在加酶量为２．０～３．５ ｍＬ时,随着加酶量的增加绿原酸提取率不断增加；在加酶量大于３．５ ｍＬ时,随着加酶量的增加,绿原酸提取率反而开始下降,因此选择３．５ ｍＬ为最佳的加酶量.
２．３．２ 提取温度对绿原酸提取率的影响 由图3可知,在提取温度为３０～４０ ℃时,绿原酸提取率随着提取温度升高而升高,在４０ ℃达到最大值,在提取温度为４０～７０ ℃时,绿原酸提取率随着提取温度的升高而降低.原因可能是绿原酸在提取温度比较高的情况下容易被氧化破坏,所以选择３０～５０ ℃为合适的提取温度.
２．３．３ 提取时间对绿原酸提取率的影响 由图4可知,在提取时间为０．５～２．０ ｈ时,绿原酸提取率随着提取时间的增加而升高,在提取时间为２．０ ｈ之后绿原酸提取率开始略有下降,原因可能是在长时间加热情况下,绿原酸结构中的酯键不稳定发生分解,所以,确定提取时间为２．０ ｈ.
２．３．４ ｐＨ对绿原酸提取率的影响 由图5可知,在ｐＨ ４．５～５．５时,绿原酸提取率随着ｐＨ的升高而升高,当ｐＨ大于５．５以后绿原酸提取率随着ｐＨ的升高而降低,说明酸性条件有利于绿原酸的提取,同时,纤维素酶的最佳ｐＨ刚好在这个区间,此时酶活力最强,这可能与绿原酸呈弱酸性有关,所以,确定为ｐＨ ４．５～６．０.
２．３．５ 料液比对绿原酸提取率的影响 由图6可知,随着料液比的减小,绿原酸提取率呈现比较稳定的状态,从成本考虑,选用１∶２０作为最佳的料液比.
２．３．６ 正交试验结果与分析 正交试验结果见表２.对正交试验有关数据作极差分析和方差分析,方差分析结果见表３,各因素对绿原酸提取率的影响程度依次为Ａ＞Ｃ＞Ｄ＞Ｂ,即在４个影响因素中,ｐＨ、加酶量对绿原酸提取率的影响较大,其次是提取温度,影响最小的是提取时间.以绿原酸提取率为考察指标,４个因素的最优组合是Ａ４Ｂ１Ｃ２Ｄ３,即ｐＨ ６.0、加酶量为３．０ ｍＬ、提取温度为５０ ℃、提取时间为１．０ ｈ.在此条件下进行３次重复试验,取均值得到绿原酸提取率为１０．０３１ ｍｇ／ｇ,高于其他组合.方差分析结果表明,ｐＨ对绿原酸提取率的影响达到极显著水平（Ｐ＜０．０１）；提取时间、加酶量、提取温度的影响不显著.
３ 小结与讨论
考察了影响纤维素酶法提取蒲公英中绿原酸的主要因素加酶量、提取温度、提取时间和ｐＨ,４个因素的影响程度为ｐＨ＞加酶量＞提取温度＞提取时间.以绿原酸提取率为考察指标,４个因素的最优水平组合是Ａ４Ｂ１Ｃ２Ｄ３,即ｐＨ ６.0、加酶量３．０ ｍＬ、提取温度５０ ℃、提取时间１．０ ｈ.在此条件下进行３次重复试验,取均值得到绿原酸提取率为１０．０３１ ｍｇ／ｇ,高于其他组合.
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[3] 蒲公英和种植业论文写作资料范文 蒲公英和种植业硕士学位毕业论文范文2500字
