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（沈阳师范大学,辽宁 沈阳 110034）
【摘 要】本文综述了近几年来出现的免疫检测技术的新方法,简要介绍了它们的原理、特点及其应用,并做出相应的比较.此外,展望了免疫检测技术的发展方向,以期为有关的科研工作者提供参考.
【关键词】检测技术；机体免疫；免疫
免疫检测技术是推动免疫学理论和技术发展的重要手段.同时它又被广泛地用于医学方面的临床病原体诊断和检疫以及生命科学的许多相关领域.近年来免疫学的发展,特别是免疫学技术与现代生物技术相结合,更加完善并提高了免疫检测的技术水平.如杂交瘤和单克隆抗体技术的出现及应用,标志着免疫学研究进入了一个新阶段.但客观地说,许多免疫学方面的进展包括各种免疫学技术和方法都是源于发达国家.国内在免疫学方面,特别是基础研方面与国外差距较大.正是从这方面考虑,作者力求将国际上各种有关的最新技术成就介绍给广大的读者,以希促进我国免疫学研究及相关研究领域的发展.
１ 免疫检测方法和技术
免疫检测技术是指利用免疫反应特异性的原理,建立各种检测与分析的技术.常规免疫检测技术主要是用于检测抗原或抗体的体外免疫血清学反应或免疫血清学技术.免疫血清学技术是建立在抗原抗体特异性反应基础上的检测技术.现代免疫检测技术的发展非常快,已有许多新的方法和技术出现.
１．１ 酶免疫分析方法
酶标记抗体技术是将抗原和抗体的特异性反应与酶的催化作用有机地结合的一种新技术.现已广泛应用于各种抗原和抗体的定性、定量测定.最初的免疫酶测定法,是使酶与抗原或体结合,用以检查组织中相应的抗原或抗体的存在.后来发展为将抗原或抗体吸附于固相载体,在载体上进行免疫酶染色,底物显色用肉眼或分光光度仪判定.这后一种技术就是目前应用最广的酶联免疫吸附试验,即ELISA.
１．１．１ 标记抗原
全酶标记抗原用于测定小分子化合物的酶的溶菌酶、苹果酸脱氢酶、葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶等,通过双功能交联剂 N- 羟基丁二酰亚胺脂与抗原共价结合.辅基标记抗原预先将葡萄糖氧化酶在酸性条件下水解成葡萄糖氧化酶蛋白和黄素腺嘌呤双核甘酸（ FAD ）两种成分,它们单独存在时无酶活性,但可组成具有酶活性的葡萄糖氧化酶.试验中,先将 FAD 标记到抗原分子上,当此标记试剂与抗体结合后, FAD 即失去重组能力.
１．１．２ 标记抗体
标记抗体酶抑制免疫测定法 常用磷脂酶 c 与 IgG 抗体分子经 水溶性碳化而亚胺共价交联 成酶标抗体, 底物 SRBC 壁中的磷脂物质.将待测样品,酶标抗体和 SRBC 加在一起,当抗原抗体结合后可抑制标记抗体中的酶对SRBC 壁中磷脂的水解能力, SRBC 则不发生溶解. 酶增强免疫测定法 此法需两种抗体试剂,首先在待测样品中加入少量半乳糖甘酶标记的抗体,经抗体、抗原结合后,加入琥珀酰化的带过量负电荷的抗体,与抗原发生第二次结合,使其表面的负电荷大大增强.
１．２ 荧光抗体技术
某些荧光物质在一定条件下,既能与抗原或抗体结合,又不影响抗原与抗体的特异性结合.用荧光抗原或荧光抗体对待检标本染色后,在荧光显微镜下观察,可看到发出荧光的抗原抗体复合物.作为蛋白质标记用的荧光物质需具备如下条件： ①有与蛋白质分子形成稳定共价键的化学基团,但不形成有害产物； ②荧光效率高,与蛋白质结合的需要量少； ③结合物在一般条件下稳定,结合后又不影响免疫活性； ④作为组织学标记,结合物的荧光必须与组织的自发荧光有良好的反衬； ⑤结合程序简单,能制成直接应用的商品.满足这些要求的荧光物质有硫氰酸荧光素（ FITC ）、四乙基罗丹明（ RB200 ）和四异论文范文罗丹明（ TMRITC ）等,其中实际上应用最广的是异硫氰酸荧光素.
１．３ 放射免疫技术
放射免疫技术又称放射免疫分析、同位素免疫技术或放射免疫测定法.该法为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性、精确性和抗原抗体反应的特异性相结合的体外测定超微量（ 10-9~10-15g）物质的新技术.广义来说,凡是应用放射性同位素标记的抗原或抗体,通过免疫反应测定的技术,都可称为放射免疫技术.目前常用的放射免疫技术有放射免疫饱和分析法和放射免疫沉淀自显影法.
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１．４ 酶联免疫检测技术
酶联免疫检测技术是当前应用最广泛的一项定性定量检测抗原或抗体的免疫酶技术.1971年,瑞典斯德哥尔摩大学的En论文范文all和Perlmann首次发表了使用酶联免疫吸附测定定量测定IgG的文章,建立并发展了ELISA,后来这种检测书开始广泛使用.之后,VALLER等人改用聚苯乙烯微量反应板作为固相载体,使ELISA操作更方便,灵敏度也显著提高.ELISA技术操作方便,其特异性强,灵敏性高.
１．５ 免疫印迹技术
免疫印迹就是蛋白质印迹.鉴定和分析抗原或抗体经常会将各种分离技术和检测方法结合起来.免疫印迹技术就是将十二烷基黄酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和ELISA相结合,具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫检测的高特异性和敏感性.免疫印迹常用于鉴定某种蛋白质,并能对蛋白质进行定向和半定量分析.免疫印迹法具有分析容量大,灵敏度高,特异性强等优点,是检测蛋白质特性,表达与分布的一种最常用的方法.
２ 免疫检测技术的应用
免疫检测技术以广泛应用于生物科学的各个领域.
2.1 免疫疾病诊断
用免疫血清学方法对论文范文动物传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病和变态反应疾病进行诊断,是免疫技术最突出的应用.尤其是酶标抗体技术,已成为多种传染病的常规诊断方法,如已有的人各型肝炎、猪瘟等 ELISA 试剂盒,它们简便、快速,又具有高度的敏感性和可重复性.
２．２ 动物植物生理活动研究
动植物中存在一些如激素、维生素等活性物质,它们在体内含量极微少,但在调节机体的生理活动中起重要作用,因此通过分析测定这些生物活性物质的含量及变化来研究机体的各种生理功能（如生长生殖等）.由于这些物质含量极低,用常规化验方法难以准确测出.目前放射免疫测定和酶免技术已能精确测出ng(10-9 g)及pg(10-12 g) 水平的物质,它们已成为测定动物、植物、昆虫中微量激素及其它活性物质,研究动物、植物生理和生物防治的重要手段.
２．３ 物种及微生物鉴定
各种生物之间的差异都可表现在抗原性不同,物种种源越远,抗原性差异越大,因此可用区分抗原性的血清学反应进行物种鉴定、物种的分类等工作.血清学反应在细菌、病原菌等微生物鉴定和血清型及亚型的分析方面已得到广泛应用.
２．４ 动物、植物性状的免疫标记
通过分析动物、植物的一些优良性状（如高产、优质、抗逆性等）的特异性抗原,然后用血清学方法进行标记选择育种,这是一个很有前途的方向,它比分子遗传学标记选择育种简便.
２．５ 免疫增强药物和疫苗的研究
疫苗研究中需用血清学反应和细胞免疫技术测定免疫的效果.在研究一些免疫增强药物,尤其研究肿瘤药物时,需用细胞免疫技术分析测定它们对机体细胞免疫功能的增强作用.因为细胞免疫是机体抗肿瘤、抗病毒的一个重要机制.
免疫技术已是分子生物学研究中必不可少的工具.本文对机体免疫检测技术进行初步的总结,对各种方法的原理以及所需要仪器设备进行了简单叙述,希望今后搜集更多更好的方法能与大家共同分享.
【参考文献】
［１］蔡文琴,王伯沄,主编.实用免疫细胞化学[M].成都：四川科技出版社,1990：968-977.
［２］李成文.现代免疫化学技术[M].上海:上海科技出版社,1992：97-100.
［３］王伯沄.免疫荧光组织化学和荧光组织化学技术[J].第四军医大学科技资料(增刊),1974,2:5-30.
［责任编辑：薛俊歌］
总结：该文是关于免疫抗体论文范文，为你的论文写作提供相关论文资料参考。
免疫抗体检查引用文献:
[1] 关于免疫的论文选题 免疫论文题目哪个好
[2] 免疫英文参考文献 哪里有免疫参考文献
[3] 免疫论文大纲模板范本 免疫论文大纲怎么写
